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細(xì)胞學(xué)堂 | 間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)的鑒定方法

更新時(shí)間:2023-05-31  |  點(diǎn)擊率:1631


間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)是一種具有高度自我更新和多向分化潛能的干細(xì)胞,存在于骨髓、脂肪組織、臍血及多種胎兒組織。在不同的誘導(dǎo)條件下,可以向除造血干細(xì)胞以外的,骨、軟骨、肌組織、皮膚、脂肪、神經(jīng)等多種組織分化。間充質(zhì)干細(xì)胞的易獲得、易擴(kuò)增、多潛能等特性使其在再生醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用前景十分光明。


對(duì)于體外培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定,通常可以根據(jù)以下三條標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行驗(yàn)證。




01

細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察

可運(yùn)用組織塊貼壁法、酶消化法以及兩種方法的結(jié)合分離出MSC,通過(guò)傳代培養(yǎng)后,進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。幾乎所有的MSC都是貼壁生長(zhǎng),具有較強(qiáng)的貼壁能力。MSC多數(shù)呈纖維細(xì)胞樣生長(zhǎng),少量呈梭形或不規(guī)則三角形。




02

表面標(biāo)志物鑒定


可采用流式細(xì)胞儀對(duì)MSC的細(xì)胞表型進(jìn)行鑒定,MSC屬混雜細(xì)胞群,其表面抗原也具有非專一性, 它可同時(shí)表達(dá)間質(zhì)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和表皮細(xì)胞的表面標(biāo)志,如粘附因子、生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子受體以及整合素家族等。


MSC的細(xì)胞表面標(biāo)志物鑒定標(biāo)準(zhǔn)為:CD105、CD73和CD90的陽(yáng)性率≥90%;而CD45、CD34、CD14、CD19和HLA-DR呈陰性,陽(yáng)性率≤5%。(如下圖)


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流式細(xì)胞儀檢測(cè) hUC-MSC 的表面標(biāo)志物


需要注意的是,陽(yáng)性標(biāo)記不具特異性,并非每個(gè)細(xì)胞都同時(shí)表達(dá)CD105、CD73和CD90。




03

多向分化潛能鑒定


MSC具有分化為脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞的能力,可通過(guò)特異性染色鑒定體外成脂、成骨和成軟骨誘導(dǎo)后的分化能力。

成脂誘導(dǎo)分化鑒定

細(xì)胞成脂分化誘導(dǎo)2周左右,于倒置顯微鏡下觀察,可見(jiàn)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)油滴,經(jīng)油紅O染色后為紅色。


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成骨誘導(dǎo)分化鑒定

細(xì)胞成骨分化誘導(dǎo)3周左右時(shí),于倒置顯微鏡下觀察,可見(jiàn)不透明區(qū)域,經(jīng)茜素紅染色后可見(jiàn)密集的紅色沉淀物呈結(jié)節(jié)狀。


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成軟骨誘導(dǎo)分化鑒定

細(xì)胞成軟骨分化誘導(dǎo)2周左右,于倒置顯微鏡下觀察,可見(jiàn)細(xì)胞經(jīng)阿利新藍(lán)染色為淡藍(lán)色。


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參考文獻(xiàn)

[1] Fernández Vallone VB, Romaniuk MA, Choi H, Labovsky V, Otaegui J, Chasseing NA. Mesenchymal stem cells and their use in therapy: what has been achieved? Differentiation. 2013 Jan;85(1-2):1-10. 

[2] 郭子寬. 間充質(zhì)干細(xì)胞及其臨床應(yīng)用中的幾個(gè)問(wèn)題[J]. 中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù), 2012, 16(1):10.

[3] 張德雙, 陳娟. 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的體外獲取、鑒定及標(biāo)記. 華西醫(yī)學(xué), 2015, 30(11): 2067-2070.


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