細(xì)胞本身特性

對于初次接觸細(xì)胞培養(yǎng)的新手來說，他們可能對懸浮細(xì)胞的理解局限于細(xì)胞以單顆獨立的狀態(tài)懸浮于培養(yǎng)基中。但實際上，有一類懸浮細(xì)胞，它們由于自身的生長特性，常會以聚團(tuán)的形式生長。例如，AtT-20細(xì)胞在正常生長過程中，會自然以聚大團(tuán)的形式懸浮生長（如圖1所示）；而U2932細(xì)胞常以聚小團(tuán)的形式懸浮生長（如圖2所示）。對于此類細(xì)胞，在初次培養(yǎng)時，建議參照權(quán)-威數(shù)據(jù)庫細(xì)胞正常生長圖片，了解并熟悉其易聚團(tuán)生長的特性，無需做特殊處理。

細(xì)胞受到刺激

在培養(yǎng)貼壁不牢的細(xì)胞（如HEK 293系列）時，若細(xì)胞受到外界刺激（如換液時未預(yù)熱培養(yǎng)基、PBS或細(xì)胞受到震蕩等），可能會導(dǎo)致細(xì)胞脫落，聚團(tuán)漂浮。另外，如購買細(xì)胞時選擇常溫運(yùn)輸發(fā)貨，細(xì)胞在到貨時也可能出現(xiàn)脫落，聚團(tuán)漂浮的情況。針對此類問題，可以通過收集聚團(tuán)漂浮的細(xì)胞，經(jīng)過適當(dāng)消化后，重新接種進(jìn)行培養(yǎng)。

大鼠背根神經(jīng)元細(xì)胞是一株貼壁生長的細(xì)胞，在常溫運(yùn)輸過程中同樣可能因為運(yùn)輸刺激，導(dǎo)致細(xì)胞聚團(tuán)漂浮（如圖5所示）。在高倍鏡下觀察細(xì)胞團(tuán)塊，大部分細(xì)胞是透亮光滑的（若不確定聚團(tuán)細(xì)胞的存活狀態(tài)，可將細(xì)胞團(tuán)消化成細(xì)胞懸液，用臺盼藍(lán)染色判斷死活細(xì)胞的比例），收集聚團(tuán)細(xì)胞后用胰酶消化，重新鋪板，經(jīng)過24 h的培養(yǎng)，細(xì)胞開始貼壁，形態(tài)逐漸伸展開，繼續(xù)培養(yǎng)2天后，細(xì)胞形態(tài)恢復(fù)正常。

圖5. 大鼠背根神經(jīng)元細(xì)胞常溫運(yùn)輸后的聚團(tuán)處理

消化不當(dāng)

在貼壁細(xì)胞的傳代過程中，消化不當(dāng)與傳代后細(xì)胞聚團(tuán)生長的現(xiàn)象密切相關(guān)。如果消化液的濃度過高或消化時間過長，細(xì)胞可能會受損，其正常的粘附能力會受到影響，進(jìn)而容易導(dǎo)致細(xì)胞聚團(tuán)。相反，如果消化時間過短，貼壁細(xì)胞只是大片地從培養(yǎng)皿底部脫落，而細(xì)胞間的粘附仍然較強(qiáng)。此時即便使用移液槍輕柔吹打，也難以將細(xì)胞團(tuán)塊分散成單細(xì)胞懸液。這種消化不足的細(xì)胞懸液接種的細(xì)胞更易傾向于聚團(tuán)生長。

為了應(yīng)對因消化不當(dāng)導(dǎo)致的細(xì)胞聚團(tuán)問題，我們需要對培養(yǎng)的細(xì)胞消化時間進(jìn)行更為精準(zhǔn)的掌控。既要確保細(xì)胞能夠充分解離，又要避免對細(xì)胞狀態(tài)造成影響。如果在傳代后發(fā)現(xiàn)細(xì)胞呈現(xiàn)聚團(tuán)生長，且細(xì)胞狀態(tài)良好的前提下，可以將細(xì)胞進(jìn)行消化處理，以獲得單細(xì)胞懸液并重新進(jìn)行接種鋪板。

血清影響

不同品牌的血清在成分上存在差異，尤其是生長因子的含量，這種差異可能會對細(xì)胞的粘附能力和生長狀態(tài)產(chǎn)生影響，進(jìn)而引發(fā)細(xì)胞聚團(tuán)的現(xiàn)象。此外，即使是同一品牌的不同批次血清，也可能因質(zhì)量波動而對細(xì)胞狀態(tài)產(chǎn)生影響，使細(xì)胞更容易聚集。因此，在培養(yǎng)對血清敏感的細(xì)胞時，應(yīng)盡量避免更換血清品牌和生產(chǎn)批次。如果確實需要更換血清，建議采取逐步替換的方式，這樣可以顯著提高血清替換的成功率，并降低細(xì)胞生長過程中出現(xiàn)聚團(tuán)的風(fēng)險。